支气管肺泡灌洗液TB—DNA测定对菌阴肺结核的临床诊断意义

日期:22022-08-23/ 人气: / 来源:网络

  【摘要】 目的 评价纤维支气管镜(简称纤支镜)支气管肺泡灌洗液(BALF)行萤光定量PCR检测TB-DNA对菌阴肺结核的临床诊断意义。方法 选菌阴肺结核患者160例行纤支镜检查,进行活检、BALF培养结核杆菌及BALF行TB-DNA测定。结果 160例经纤支镜BALF培养结核杆菌、BALF行TB-DNA测定阳性的检出率分别是63.33%和81.67%;其中100例行纤支镜活检,经病理证实符合结核的68例,检出率68%。结论 支气管肺泡灌洗液TB-DNA测定对菌阴肺结核具有较高的临床诊断意义。doi:10.3969/j.issn.1004-7484(s).2013.09.057 文章编号:1004-7484(2013)-09-4840-01临床上菌阴肺结核病人因其临床症状及影像学不典型、多变且无特异性,容易误诊、漏诊,给临床诊断带来困难,为此我们对我院2009——2011年160例菌阴肺结核病人行纤支镜支气管肺泡灌洗液(BALF)中TB-DNA测定,探讨支气管肺泡灌洗液(BALF)中TB-DNA测定对菌阴肺结核的临床诊断意义。1.1 临床资料 160例研究对象系我院2009——2011年住院病人,均为不明原因肺部阴影,既往无结核病史。均行纤支镜支气管肺泡灌洗液(BALF)中TB-DNA测定,男性90例,女性70例,年龄16-68岁,平均年龄42岁。分别为咳嗽、无痰及体检发现肺部阴影就诊,且不具备结核病临床表现,胸部CT可见阴影,均不在肺部结核病好发部位(如上叶尖后段、下叶背段),经6次痰涂片找结核菌阴性,PPD阴性,痰结核菌培养阴性,为明确诊断均行纤支镜检查,进行活检、BALF培养结核杆菌及BALF行TB-DNA定性测定。1.2.1 纤支镜取材及标本处理方法 纤支镜常规进行,依据胸部CT确定部位,纤支镜下观察气管、支气管情况,参照影像学所示的病灶位置,在相应的段或亚段TBLB夹取3-5块组织,用10%液固定送病理检查,后再以37℃无菌生理盐水20ml分3次在相应的肺段灌洗,随后负压吸引,回收量应达30%以上。收集的BALF做结核菌培养及TB-DNA定性测定。1.2.2 PCR法检测 试剂采用中山大学达安基因股份有限公司PCR检测试剂盒,仪器采用美国ABI-7500PCR分析仪器,操作步骤严格按说明进行。1.3 病例诊断标准 刷检、术后痰涂片抗酸染色查结核菌、灌洗液结核菌培养、病理活检,至少1项阳性者,诊断为肺结核。160例经纤支镜BALF培养结核杆菌(101/160)、BALF行TB-DNA测定阳性(131/160)的检出率分别是63.33%和81.67%,见表1,BALF行TB-DNA测定阳性率高于纤支镜BALF培养结核杆菌(x2=28.03,P自20世纪80年代中期以来,结核病出现全球性恶化趋势,大多数结核病疫情很低的发达国家结核病卷土重来,众多发展中国家的结核病疫情出现明显回升,全球约有三分之一的人曾受到结核分枝杆菌的感染,每年有800-1000万新发病例及300万人死于该病,结核病再度成为危害人类健康的重大公共卫生问题,故早期诊断对结核病的防治意义重大。痰涂片抗酸杆菌和结核菌培养是目前诊断肺结核的金标准。涂片法简单、快速、经济,但灵敏性差,检出率低,通常5000-10000条菌/ml才能得到阳性结果,且不能将结核杆菌与其他分支杆菌区分开来[1]。培养法一般要4-8周,快速培养也要2周。这些均影响结核病的诊断和防治工作。要控制结核的发生和流行,准确及时地诊断结核病,对菌阴肺结核的诊断是重要的一环。但菌阴肺结核的诊断缺乏金标准[2],其中大多数的诊断主要依据仍然是临床表现和影像学特征,误诊和漏诊现象时有发生,是结核病防治工作中的棘手问题。1985年Mullis创建了PCR技术,1989年Hance等首先将该技术应用于检测分枝杆菌,从而开辟了以PCR为代表的分子生物学技术检测结核分枝杆菌阶段。PCR技术高灵敏度,高特异性,可检测1-100fg纯化结核分枝杆菌DNA,为菌阴肺结核患者的诊断提供了良好的前景。但由于常规PCR技术存在扩增产物污染带来的假阳性和不能定量的问题,使其难以发挥有效作用。本文使用的方法为荧光定量PCR(FQ-PCR)技术,其集PCR和DNA探针杂交技术的优点为一体,直接探测PCR过程中的荧光变化,获得DNA模板的准确定量结果。整个过程在闭管状态下进行,避免了因污染而导致的假阳性,使结果准确可靠,具有高敏感性、高特异性、高精确性特点[3]。李素华等[4]的研究显示使用实时荧光定量PCR法对临床192例各检样进行TB-DNA检测,其中脓液、肺泡灌洗液、痰液和胸水中的阳性率最高,分别达到47.4%、25.7%、30.4%、8.7%。本文显示支气管肺泡灌洗液结核DNA检测阳性率均高于纤支镜BALF培养结核杆菌及纤支镜活检阳性率,且由于BALF直接取自病灶处支气管肺泡内,细菌浓度高,污染几率低,且无痰患者也可以检测,使阳性率大大提高,从而进一步增加了PCR检测肺结核的敏感性和特异性,且行肺泡灌洗的病例纤支镜术后出血、气胸等的并发症低于纤支镜活检。总之,支气管肺泡灌洗液直接取材于病变部位,通过纤支镜负压吸出,避免了其他菌的污染,准确性高[5]。检测肺泡灌洗液TB-DNA是快速诊断结核感染的一种方法,尤其是为菌阴肺结核的诊断和鉴别诊断提供了有力证据。但PCR不能区分死菌与活菌,对于治愈的肺结核,如果肺内有死的结核杆菌,PCR检测仍可为阳性,因此对病情的判断还应结合临床其他检查结果综合判断。[1] 张翊,卢建平,叶淼.四种结核分枝杆菌检测方法的临床应用评价.中国防痨杂志,2006,28(1):14-17.[2] 周林,成诗明,黄飞,等.县级结核病防治机构胸部X线诊断现状分析.中国健康教育,2006,22(8):587-588.[3] 韩俊英,曾瑞萍.荧光定量PCR技术及其应用[J].国外遗传学分册,2000,3(23):117-120.[4] 李素华,陈莉,王欢.荧光定量PCR检测TB-DNA在各类检样中的阳性率分析,2007,17(6):752-753.[5] 彭勋,常占平,王洪芬,等.纤维支气管镜检查对不典型肺结核的诊断价值.河北医药,2004,26:870-871.

作者:小编


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